断奶仔猪多系统衰竭综合征防控效果比较与分析
康国俊1，吴文深2， 魏光河3，田代双1
（1.重庆市秀山土家苗族自治县畜牧技术服务中心 重庆409900；
2. 重庆市秀山土家族苗族自治县里仁镇畜牧兽医站 重庆 409900；
- 西南大学荣昌校区动物医学系 重庆402460）
摘要：为获得绿色、有效的断奶仔多系统衰竭综合征防控措施，通过免疫屠宰前60天左右的10头健康育肥猪制备猪圆环病毒2型高免血清，对疑似感染有猪圆环病毒2型的规模猪场母猪及仔猪从预防、紧急治疗两个方面探讨两种生物防控法的防控效果。结果表明，对母猪、断奶仔猪注射制备的猪圆环病毒2型血清抗体制剂并配合敏感抗菌素，其从出生到断奶后30天的存活率及紧急治疗的治愈率均最高，分别达97%和100%；使用猪圆环病毒2型疫苗其次，分别为86%和85%，空白组即仅仅采取加强饲养管理最低，存活率仅为55%。猪圆环病毒2型血清抗体结合使用敏感抗菌素是疑似感染猪圆环病毒2型的规模猪场最有效的生物防控手段。
关键词：断奶仔猪多系统衰竭综合征；猪圆环病毒；生物防控法
断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)是由猪圆环病毒2型病毒引起的断奶仔猪渐行性消瘦并发反复性腹泻和咳嗽为特征的一种传染病。该病毒能严重侵害断奶仔猪免疫系统，使患病仔猪免疫抑制而并发或继发各类细菌性或其他条件性疾病，导致规模猪场仔猪死亡率增加和经济效果显著降低，严重影响养猪业的发展[1-3]。目前，该病毒以隐性感染潜伏于母猪及仔猪机体导致规模猪场病死率增加的报道较多，在全世界广泛流行和感染。
疫苗免疫是防控猪圆环病毒病的主要手段和措施。但猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒病及其他免疫抑制性疾病的隐性感染使该病免疫失败报道较多，刘建波、唐慧稳等[4-6]探讨了针对断奶仔猪多系统衰竭综合的防控措施，有效地减缓了该病对养猪业的危害。本文利用探讨的免疫程序制备猪圆环病毒2型高免血清抗体，从预防和紧急治疗探讨该抗体对猪多系统衰竭综合征的防控效果，现将具体研究内容报道如下。
1 试验材料与动物
1.1 主要药品与试剂
猪圆环状病毒2型基因工程次单位疫苗、猪圆环病毒2型诊断试剂盒（批号20061106，均由原大丰兽疫血清股份有限公司生产）、硫柳汞钠（国药集团生产）；培养基、1 moL/L氢氧化钠、1 moL/L HCl、25%葡萄糖、25%黄芪多糖注射液等，由实验室自配，均在有效期内。
1.2 试验动物和试验猪场
免疫血清抗体来自重庆市荣昌县昌元镇石河村某小型养猪户饲养的10头60 kg左右生长育肥荣昌土杂猪；试验猪场为原重庆市垫江县中华养猪场；试验动物为该中华养猪场疑似感染猪圆环病毒2型的60头断奶外三元杂交商品仔猪、9头200 kg左右长白种母猪和2头杜洛克种公猪，试验用断奶仔猪及种公猪、种母猪均未有猪圆环病毒疫苗免疫史。
1.3 猪圆环病毒2型高免血清抗体的制备
1.3.1 免疫和血浆的收集
对10头60 kg左右的生长育肥猪按每15 d免疫1次，通过颈部肌肉注射免疫猪圆环病毒2型疫苗。首次注射量加倍，后按疫苗生产厂家参考使用剂量免疫，屠宰前2～5 d按3倍剂量免疫。屠宰，无菌收集血液，加入3.8%抗凝剂，轻轻搅拌混匀，4℃静置备用。
1.3.2 猪圆环病毒2型高免血清抗体的制备
5 000 rpm 离心备用血浆，取上清液-20℃保存24～48 h后解冻并过滤，滤液置500 mL试剂瓶，按0.04%加入硫柳汞钠和双抗，混匀，编号，4℃保存备用，即为制备的猪圆环病毒2型高免血清抗体。
1.3.3 猪圆环病毒2型高免血清抗体效价的测定
参照购买的猪圆环病毒2型ELISA检测试剂盒操作步骤，对收集来自免疫猪圆环病毒2型疫苗的10头育肥猪血清进行抗体效价定性检测，判定标准：以空白孔调零，在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.7,阴性对照平均OD630nm值必须小于0.3。样品OD630nm值大于0.42判为阳性；样品OD630nm值介于0.38～0.42判为可疑；样品OD630nm值小于0.38判为阴性。记录检测结果备用。
1.3.4 猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂的配制
取250 mL规格的灭菌烧杯，分别按6%、20%、20%加入制备的猪圆环病毒2型高免血清抗体、25%的黄芪多糖及25%葡萄糖, 混匀，分装，编号，4℃保存备用，即为制备的猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂。
1.3. 猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂无菌检验
参照姚火春等[7]配制普通琼脂培养基和肉汤培养基，37℃静置24 h作无菌检验，选无菌检验合格的两种培养基4℃保存备用。
取制备好的猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂20 mL，分别于肉汤、琼脂培养基按2 mL/管、2 mL/个加入5管肉汤培养基和5个琼脂培养基，分别混匀和涂匀，37℃静置24～48 h，观察并记录试验结果。
1.3.6 猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂生物安全性试验
购买的12头断奶荣昌小公猪观察5 d，按3头/组将其分为4组，即空白对照组、试验组1、试验组2和试验组3。试验组1、试验组2和试验组3分别按0.25 mL/kg、0.5 mL/kg、1 mL/kg注射各组内的3头试验猪只，空白对照组不注射任何试剂，观察7～10 d，记录注射猪只的呼吸、体温、脉搏、粪便形状、尿液色泽等常规生理指标，记录试验结果。
1.3.7 临床对比试验
将待试验的60头断奶仔猪、9头种母猪及2头杜洛克种公猪分为预防组（简称Y，下同）、治疗组（简称Z，下同）及空白对照组（简称K，下同）。具体分组见表1。其中，预防组Y-1于母猪产前1 d、产后第5～7天分别按0.1 mL/kg给母猪注射猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂，仔猪于出生后第12～15天、断奶前1 d分别按0.2 mL/kg注射猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂，种公猪于每次直配前2 d按0.1 mL/kg注射猪圆环病毒2型高免血清制剂；预防组2按生产厂家提供的使用剂量分别于母猪配种前10 d免疫猪圆环病毒2型疫苗、产前1个月加免1次，仔猪于12～15日龄免疫猪圆环病毒2型，种公猪按上下半年各免疫1次，每次2头份的免疫程序免疫猪圆环病毒2型疫苗；观察出生到出生后40 d，收集初生仔猪存活头数、弱仔数、腹泻数量、死亡数量等指标，记录试验结果，备用。
针对出现渐行性消瘦及反复腹泻的断奶仔猪，设置3组作对比试验，Z-1组给发病仔猪按0.3 mL/kg肌肉注射猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂的同时，颈部对侧肌注恩诺沙星注射液，上下午各1次，连用2 d；Z-2组按3倍剂量肌肉注射猪圆环病毒2型灭活疫苗，于紧急加倍免疫的第2天于注射疫苗的对侧颈部肌肉注射恩诺沙星，上下午各1次，连用2 d；Z-3组仅注射恩诺沙星注射液，上下午各1次，连用2 d。三组均观察10～15 d，观察试验猪群的腹泻发生率、死亡率等，收集并记录试验结果备用。
空白对照组仔猪和母猪均不注射猪圆环病毒2型病毒灭活疫苗，其他疫苗、保健等按猪场常规管理进行操作，观察并记录该组母猪的初生仔猪存活率及平均头数、仔猪腹泻发生率及断奶仔猪发病与死亡率等指标。
表1 临床试验分组
| 组别 | 小组 | 注射内容 | 试验仔猪数量 | 试验母猪数量 |
| 预防组 | Y-1 | 抗体制剂 | 3+1 | |
| Y-2 | 猪圆环病毒2型疫苗 | 3+1 | ||
| 治疗组 | Z-1 | 抗体制剂+对症防控 | 20△ | |
| Z-2 | 倍量猪圆环病毒2型疫苗+对症防控 | 20△ | ||
| Z-3 | 对症防控 | 20△ | ||
| 对照组 | K | —— | 3 |
注：表中“3+1”代表试验的3头经产母猪及1头公猪；20△代表试验的断奶仔猪头数。
2 结果
2.1 猪圆环病毒2型高免血清抗体的制备
于37℃恒温静置培养48 h，3个营养肉汤不浑浊，无菌泥沉淀；3个琼脂培养基未见菌落生长，表明制备的高免血清抗体未受污染，满足后续试验要求；ELISA法检测该高免血清，猪圆环病毒2型抗体效价均呈阳性，表明经免疫猪圆环病毒2型疫苗的育肥猪制备的血清含有该病毒抗体，符合本试验的要求。
2.3 猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂生物安全性试验结果
按0.25 mL/kg、0.5 mL/kg、1 mL/kg分别注射试验用荣昌小公猪，除1 mL/kg剂量组于注射后2 d内有2头试验猪出现精神略微沉郁、食欲略有降低外，其他各组包括空白对照组试验猪只体温、食欲、呼吸频率、粪便色泽及形状、尿液色泽均正常；表明该抗体制剂在按1mL/Kg及其内的剂量注射时对猪机体无毒性作用。
2.4 两种生物防控法对疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征临床对比试验结果
具体结果见表2。表2可知，从预防的效果看，用制备的猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂通过对经产母猪、种公猪、初生仔猪作预防保健，其初生仔猪的存活头数最高，3头试验母猪共生产38头存活的初生仔猪，从出生到断奶后30 d内的仔猪存活率也最高，达97%；用猪圆环病毒2型疫苗免疫其从出生到断奶后30 d的仔猪平均存活率其次，为86%；空白对照组最低，3头试验母猪提供的初生仔猪存活头数及到断乳后30 d的平均存活率分别为33%和55%。
治疗效果看，采取猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂并结合对症治疗组其治愈率最高，为100%，其次是紧急加倍剂量免疫猪圆环病毒2型疫苗并结合对症治疗，治愈率为85%；单纯采取对症疗法治愈率最低，仅70%。
表2 两种生物防控法对疑似猪圆环病毒病的临床试验对比结果(单位:%)
| 组别 | 试验数量 | 初生仔猪存活数 | 哺乳期腹泻率 | 哺乳期死亡率 | 断奶后30天发病率 | 断奶后30天死亡率 | 平均存活率/治愈率 |
| Y-1 | 3＊+1 | 38 | 2/38 | 1 | 2 | 0 | 97% |
| Y-2 | 3＊+1 | 35 | 12/35 | 3/35 | 5/32 | 2/32 | 86% |
| Z-1 | 20△ | 0/20 | 0 | 100% | |||
| Z-2 | 20△ | 8/20 | 3/20 | 85% | |||
| Z-3 | 20△ | 12/20 | 6/20 | 70% | |||
| K | 3＊ | 33 | 22/33 | 8/33 | 13/25 | 7/25 | 55% |
注：表中“3＊+1”代表试验的3头经产母猪及1头公猪；20△代表试验的断奶仔猪头数。表中Y-1、Y-2、K最后一列百分数为平均存活率；Z-1、Z-2、Z-3最后一列百分数为治愈率。
3 分析与讨论
3.1比较
血清抗体是用某种免疫原刺激动物机体后浆细胞分泌产生的特异性产物，其含有的活性因子及特异免疫球蛋白对事先刺激的免疫原具体高度灵敏性和专一性。对猪免疫各种病原疫苗刺激机体产生有效抗体是规模猪场防控各种疾病的主要方式和途径。不同于病原疫苗的常规预防功效，血清抗体更多用于疫病暴发时的紧急治疗。两种方法都是规模猪场防控疾病发生有效生物防控手段，但不同疫病环境下其两种防控手段的防控效果各异，本研究通过免疫屠宰前60天左右的健康育肥猪并屠宰收集血液制备血清，从预防和紧急治疗两个方面用具体试验数据对猪圆环病毒2型疫苗和猪圆环病毒2型抗体制剂的防控效果作了比较，结果表明，在疑似已隐性感染有猪圆环病毒2型病毒的规模猪场，使用猪圆环病毒2型高免血清抗体制剂能收到更好的防控效果，从出生至断乳后30 d的存活率可达90%，有助于大大提高规模猪场断乳仔猪成活率，是规模猪场断奶仔猪可取的有效预防疫病发生的防控措施和方案。
3.2不足
针对疑似隐性感染有猪圆环病毒2型的某规模猪场，本研究选择免疫育肥猪制备猪圆环病毒2型血清抗体，由于时间和购买的试剂盒限制，本研究只通过试剂盒对制备的血清抗体进行了定性检测，其结果全部阳性尽管符合本研究的需要，但并不知道该血清抗体内猪圆环病毒2型的抗体效价是本研究的一大遗憾。
3.3验证
本研究从预防和紧急治疗两个方面探讨用猪圆环病毒2型疫苗和猪圆环病毒2型血清抗体的防控效果，从试验的仔猪及母猪看，针对感染猪圆环病毒2型的规模猪场,给发病仔猪和母猪注射猪圆环病毒2型血清抗体并对症使用敏感抗菌素，能有效提高初生仔猪存活头及发病仔猪的存活率，这一方面验证猪圆环病毒2型易导致患病猪免疫抑制进而继发其他条件性致病的感染这一特点，又说明规模猪场其疾病的感染已不局限于单一疾病，更多是混合感染的特点[8,9]。(编辑：狄慧)
参考文献略
本文原文刊于《中国动物保健杂志》2014年9月刊，更多内容可关注本刊微信订阅号zgdwbj
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