奶牛乳房炎是奶牛养殖中最普遍、危害最大的疾病之一，严重制约着奶牛业的发展。乳房炎不仅影响奶牛的产奶量，降低奶牛养殖效益，导致奶牛泌乳功能的丧失，甚至被淘汰，同时也影响牛奶品质，危害人类健康[1]。引起奶牛乳房炎的原因也非常复杂，如：链球菌、金色葡萄球菌、真菌、大肠杆菌等多种致病菌，以及病毒都可以使乳房感染，发生乳房病变；另外饲养管理不善、环境卫生太差、挤奶技术不规范，及外力所致乳房外伤等均可导致奶牛乳房炎的发生。由于其病因太过复杂，使得奶牛乳房炎的防治有较大的难度。本研究对华北、东北部分地区重点奶牛场中奶牛乳房炎进行了病原学调查，以期针对性防治乳房炎，更好地为奶牛产业发展做出贡献。
1 材料
1.1 乳样 乳样采自天津、河北、内蒙、辽宁等华北、东北部分地区的牛场，用兰州乳房炎诊断试剂（简称LMT）进行奶牛隐性乳房炎的现场快速诊断，对诊断结果呈阳性者，进行采样，共采集样品40份。 在采集奶样品前，用碘酒消毒乳头酒精脱碘后，每个乳头废弃前三把奶，采集收取40mL乳样，避免乳样与手指的接触污染等，盖好瓶盖，进行编号，冰箱冷藏保存。 1.2 试剂 试验所用所有化学试剂均为国产分析纯。 1.3 培养基 依《中华人民共和国兽药典》（2010版）附录137、154页制作普通肉汤培养基、胆盐乳糖发酵培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、四硫磺酸钠亮绿培养基、麦康凯培养基、改良马丁培养基、沙门志贺菌属琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基和甘露醇氯化钠琼脂培养基。 鲜血琼脂培养基[2]：将灭菌的营养琼脂加热融化，冷至45℃时，加入无菌鲜血达5%（即每100mL营养琼脂中加入鲜血5mL～6mL）倾注于平皿，待凝固后，置37℃培养1日~2日，有污染者废弃，无菌者保存于冰箱备用。 1.4 血浆制备 无菌采集健康家兔血，放置于灭菌的容器内，磁力搅拌15min后装入灭菌离心管中，经12000rpm离心15min，取上清液备用。
2 方法
2.1 细菌分离培养[3] 取已编号乳样品10mL，直接接种至适量的胆盐乳糖培养基中，37℃培养24h，取培养物画线接种于曙红亚甲蓝培养基的平板上，培养24h。若平板上无菌落生长或生长的菌落与表1所列的菌落形态特征不符，则此乳样品未检出大肠杆菌。若平板上生长的菌落与表1所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的生化试验，确认是否为大肠杆菌。 取已编号乳样品10mL，直接接种至适量的营养肉汤培养基中，混匀，培养24h，取上述培养物1mL，接种于10mL四硫磺酸钠亮绿培养基中，培养24h后，划线接种于沙门、志贺菌属琼脂培养基上，培养24h。若平板上无菌落生长，或生长的菌落不同于表1所列的特征，则判断为此乳样品未检出沙门菌。若平板上生长的菌落与表1所列的菌落形态特征相符或疑似，用接种针挑选2~3个菌落分别于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养24h，如斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色、底层无黑色，判断此乳样品未检出沙门氏菌。否则，应取三糖铁琼脂培养基的培养物进行适宜的生化实验，确认是否为沙门氏菌。 取已编号乳样品10mL，直接接种至营养肉汤培养基中，培养24h后，取上述培养物，划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基上，培养72h。若平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表1所列特征，判断此乳样品未检出金黄色葡萄球菌。若平板上生长的菌落与表1所列的菌落特征相符或疑似，挑选2~3个菌落 ，分别接种于营养肉汤培养基中，培养18h~24h，做血浆凝固酶试验。 取已编号乳样品10mL，直接接种至鲜血琼脂平板上，培养24h后，挑取表面光滑、隆起的灰绿色，外层有明显的β溶血环的可疑菌落，若鲜血平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表1所列特征，判断此乳样品未检出链球菌。若平板上生长的菌落与表1所列的菌落特征相符或疑似，挑选2~3个可疑菌落 ，分别接种于麦康凯培养基、改良马丁培养基和血清肉汤中，培养72h。在麦康凯培养基不生长，在改良马丁培养基中底部有沉淀，在血清肉汤中先均匀浑浊，后在试管底部形成沉淀，上部澄清，不形成菌膜。做CAMP试验，在两菌的交界处溶血力增加，出现矢形（半月形）溶血区，则判断呈阳性确认是β-链球菌。 2.2 生化试验[4] 糖发酵试验 取可疑菌落接种于乳糖，蔗糖，麦芽糖，甘露醇培养基，37℃培养24h后，观察其对糖的利用情况，观察7天。
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本文全文刊于本杂志2012年11月刊，可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章，作者：刘 少娟，如若转载，请注明出处：http://zgdwbj.com/archives/11031
