致病性大肠杆菌血清型的鉴定与药敏试验

摘要:在锦州地区发病鸡群中采集病料,经血清型鉴定为O78型。通过对这种致病性大肠杆菌进行药敏试验,发现在9种受试药物中,极度敏感的药物有一种为丁胺卡那霉素;高度敏感的药物有两种分别为环丙沙星、庆大霉素;该菌种已对其他六种药物产生了耐药性。该试验结果将对锦州地区肉鸡大肠杆菌病的防治具有一定的参考价值。
关键词:大肠杆菌;血清型;药敏试验
大肠杆菌病在临床上较为常见,特别是在肉鸡的养殖中较为普遍。目前大肠杆菌病在许多养鸡场广泛流行,其发病率和死亡率居高不下,加之大肠杆菌极易产生耐药性,给该病的治疗带来不小的难度[1]。
2011年6月9日锦州市园树农场一位养殖户送检了3只27日龄的白羽肉鸡,通过问诊了解到此群肉鸡存栏1000只,在进雏后的第四天就开始就出现了类似感冒的症状,主要表现为打蔫、咳嗽、拉白色粪便,最近每天都出现鸡只死亡现象,平均每天死亡6、7只,共计死亡70多只。就诊前曾用过利巴韦林等药物,未见好转。通过剖检发现三只鸡均有纤维素性心包炎、肝周炎及肠道广泛出血的病理变化。通过剖检变化初步诊断为大肠杆菌感染,为了确诊我们采集病料进行了大肠杆菌血清型的鉴定与药物敏感试验,最终该病得以治愈,为养殖户挽回了经济损失。

1材料与方法
1.1材料
1.1.1病料
将病鸡的心脏、肝脏进行无菌采集。
1.1.2培养基
普通营养琼脂购自北京奥星生物技术有限责任公司;麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂购自上海医药试剂公司。
1.1.3血清
大肠杆菌O型血清购自中国兽药监察所。
1.1.4药物
阿奇霉素、氧氟沙星、丁胺卡那霉素、环丙沙星、洛美沙星、头孢噻肟、恩诺沙星、庆大霉素、阿莫西林等9种药物均购自齐鲁动物保健品有限公司。
1.2方法
1.2.1药敏片的制备
选取优质定性滤纸,用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片,每100片分装于无菌小瓶里,121℃高压20min,烘干备用。将所用药物按表1配制成所需浓度,将灭菌滤纸每100片浸泡于1ml药液中,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液。同时在瓶口上记录药物名称,放37℃温箱内过夜,干燥后即密盖,切勿受潮,置阴暗干燥处存放,有效期3~6个月。
1.2.2每片药敏片中药物的含量
见表1。
1.2.3细菌分离
采用无菌方法,用接种环在病死雏鸡肝脏吊取病料,划线接种于麦康凯琼脂平板上,37℃培养18~24h。挑取单个菌落,于普通琼脂平板上进行纯培养,37℃培养18~24h。挑取单个菌落,进行革兰氏染色、镜检。
1.2.4生化试验
1.2.4.1糖发酵试验
取纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管,37℃培养2~3d,观察结果。
1.2.4.2吲哚试验
取纯培养物接种蛋白胨水,37℃培养2~3d,加入吲哚指示剂,观察结果。
1.2.4.3VP试验
取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水,37℃培养2~3d,加入VP指示剂,观察结果。
1.2.4.4枸橼酸盐试验
取纯培养物接种枸橼酸盐培养基上,37℃培养18~24h,观察结果
1.2.4.5硫化氢试验
取纯培养物接种醋酸铅琼脂,37℃培养18~24h,观察结果。
……
……
本文全文刊于本杂志2011年10月刊

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