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归芪饮安全药理学试验研究

摘要:23日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡640羽随机均分为6个不同剂量用药组、1个疫苗对照和1个空白对照组,另取60羽设1个疫苗对照组和1个空白对照组,30羽/组,除空白对照组外均用新城疫Ⅳ系苗滴鼻、点眼免疫(3羽份/羽),37日龄二免。在免疫的同时,6个用药组分别饮水添加6种浓度的的归芪饮,0.5mL/羽,每天1次,连续3d;给药后每天观察各组鸡群精神、活动、采食、饮水和发病死亡情况;分别于免疫后第7、14、21、28、35和42天翼静脉采血,检测血清NDV-HI抗体效价;于首次免疫后第8周选取0.5g/mL、1g/mL、1.5g/mL、2g/mL4个剂量组(50羽/组),1个疫苗攻毒对照组(50羽/组),1个空白攻毒对照组(50羽/组),1个疫苗对照组(30羽/组)和1个空白对照组(30羽/组)进行攻毒保护试验。同时,进行了体外刺激外周血T淋巴细胞转化增殖试验。结果显示,各组给药后未见任何不良反应,各剂量组在各时间点的抗体效价多明显或显著高于疫苗对照组和空白对照组,1g/mL剂量组鸡只末重显著增加,1g/mL、1.5g/mL剂量组日增重显著高于对照组,料重比显著低于对照组,2g/mL剂量组料重比显著低于对照组;1.5g/mL组的攻毒保护率最高,其次为1g/mL剂量组;体外试验结果也显示,归芪饮在合适的剂量可以刺激外周血T淋巴细胞增殖。表明归芪饮临床应用安全,增强细胞免疫和体液免疫的效果确实,可以将1-2g/mL剂量作为临床试验应用剂量,1g/mL剂量最佳。
关键词:归芪饮;临床给药反应;抗体效价;生长性能;攻毒保护;体外增殖
归芪饮是以当归,黄芪、淫羊藿、山楂、枸杞、苍术六味中药经过现代工艺提取制成的口服液,是一种具有免疫增强作用的复方制剂。
药效试验已经证实归芪饮具有较佳的免疫增强作用,能够有效提高鸡体的体液免疫功能,显著增强新城疫疫苗的免疫效果。本试验进一步观察了系列剂量的归芪饮对鸡的给药反应和对新城疫苗免疫效果的影响,及其在体外对T淋巴细胞增殖作用的影响,旨在确证归芪饮的安全性和药理作用,并为临床试验筛选出最佳剂量。
1材料与方法
1.1试验药物
试验药品由南京日升昌生物技术有限公司提供(批号:2009062601)。分别将药液配制成浓度为0.5g/mL、1g/mL、1.5g/mL、2g/mL、2.5g/mL、3g/mL。
1.2疫苗和毒株
新城疫IV系疫苗(LaSota株),批号089042,南京天邦生物技术有限公司生产。
新城疫检测抗原,用新城疫IV系弱毒苗。
新城疫强毒株,由南京农业大学中兽医实验室提供。
1.3主要试剂
淋巴细胞分离液,天津灏洋生物制品科技有限公司,批号20090228。
植物血凝素(pHA),Sigma分装,用RPMI1640培养液配制成0.5mg/mL,0.22μm的微孔滤膜过滤除菌,分装-20℃保存。
四甲基偶氮蓝(MTT)溶液(Sigma进口分装),用pH值7.4的PBS配成成5mg/mL的溶液,0.22µm微孔滤膜过滤除菌,分装,4℃避光保存。
裂解液,二甲基亚砜(DMSO),Sigma分装。
1.4动物分组及处理
1日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡(购自南京汤泉农垦种鸡场)饲养至23日龄(平均体重161g/羽,平均母源抗体效价3.5Log2)时,取640羽随机均分为8组,每个组4个重复,分别为6个不同剂量用药组、1个疫苗对照和1个空白对照组;另取60羽设1个疫苗对照组和1个空白对照组,30羽/组,隔离饲养,除2个空白对照组外均用新城疫Ⅳ系苗滴鼻、点眼免疫(3羽份/羽),37日龄二免。在首次免疫的同时,6个用药组分别饮水添加6种浓度的的归芪饮,0.5mL/羽,每天1次,连续3d。(即分别为每羽0.25g、0.5g、0.75g、1.0g、1.25g、1.5g生药量),然后进行临床观察和免疫效果测定。
分别于首次免疫后第7(D7)、14(D14)、21(D21)、28(D28)d35(D35)、42(D42)、每组随机抽取20羽,翼下静脉采血,分离血清,用ß-微量法检测血凝抑制(Hemagglutinationinhibition,HI)抗体效价。

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