利用猪瘟活疫苗(传代细胞源)防控和净化猪瘟

        猪瘟(classical swine fever,CSF)是由黄病毒科瘟病毒属中的猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的一种严重危害我国养猪业的烈性传染病,因其致死率高、危害严重,而受到各养猪国家的关注。经过多年的努力,我国已经成功的控制了猪瘟在我国大范围的爆发流行。然而,近些年来猪瘟在我国出现了一些新的流行动向值得我们特别关注。

        近年来,我国猪瘟的流行特点发生了明显的变化:在成年商品猪,急性、典型性猪瘟病例在逐渐减少,多以非典型性、慢性及隐性猪瘟形式出现,局部区域散发流行较多,大区域积暴发流行少见;在种猪,猪瘟病毒持续带毒感染是目前最为头疼的问题,带毒母猪将猪瘟病毒经胎盘垂直传播给胚胎,即可引起严重的流产和弱死胎,又使带毒母猪的卵巢等生殖器官产生器质性病变,导致繁殖障碍;在新生仔猪,经带毒母猪先天感染导致的死亡和免疫耐受是目前仔猪死亡的主要原因之一。因此,不表现临床症状带毒母猪的垂直传播及猪群中水平传播是造成目前猪瘟持续感染的根本原因。养殖场对猪瘟的净化不彻底,已经严重危害到我国养猪业的健康发展。

        我国培育的中国系(C 系)猪瘟兔化弱毒是目前世界上最好的猪瘟疫苗种毒之一,世界上许多国家通过免疫接种这种疫苗,控制以至消灭了猪瘟。中国兽医药品监察所的实验室工作也证明,猪瘟兔化弱毒疫苗免疫接种猪可完全有效地抵抗各种我国流行的不同基因亚群猪瘟野毒株的攻击。可以看出,猪瘟兔化弱毒疫苗仍然是我国预防控制猪瘟非常有效的疫苗。

        本方案应用高效价的猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫猪群,通过猪瘟抗体监测的方法,淘汰不合格的种猪以达到防控和净化猪瘟的目的。我国是世界上养猪最多的国家,每年生猪养殖量约10 亿头,应用本方案,每减少发病或死亡1%,可减少200 万头猪发病或死亡,以每头猪损失300 元计,即减少损失6 亿元。同时因防控和净化猪瘟,从而减少猪链球菌病、伪狂犬病等病继发感染造成的损失,社会效益非常显著。大力推广应用猪瘟活疫苗(传代细胞源)防控和净化猪瘟方案,可明显提高养殖单位的猪病整体防控水平,极大降低化学药品滥用情况,有效解决动物胴体中药物残留问题,从而在根本上保证人民群众的食品卫生,保障人民群众的身体健康。因此,该产品的推广,有利于绿色养猪业的发展,完善国家“菜篮子”工程。因此,该方案生态效益显著。

        本方案的创新点在于利用猪瘟活疫苗(传代细胞源)来防控和净化猪瘟。

        一、选择猪瘟活疫苗(传代细胞源)理由

        防控猪瘟,最重要的是两点,一是要保证种猪不感染猪瘟野毒,二是对所有猪加强疫苗免疫接种。经验证明,在保证种猪不带猪瘟野毒的情况下,如果商品猪的群体抗体阳性率保持在85%以上,种猪抗体阳性率达到95%以上,则猪瘟可以得到有效控制。目前该病主要通过疫苗来预防控制,因此,猪瘟疫苗质量的好坏直接影响到猪场的生产。当前,猪瘟疫苗主要有牛睾丸细胞苗、兔源疫苗和猪瘟活疫苗(传代细胞源)。我国的猪瘟疫苗存在两大问题,一是疫苗中病毒含量低,二是容易存在外源病毒污染。在脾淋组织疫苗方面,我国现有猪瘟兔脾淋组织疫苗工艺落后,制造疫苗所需的健康合格兔数量太少,远远满足不了需要,同时疫苗中病毒含量低;在牛睾丸原代细胞疫苗方面存在病毒含量太低,在其他疫病病原,特别是免疫抑制性疾病病原单独或多重混合感染,母源抗体存在的情况下,很难达到应有的免疫效果。除此之外,由于牛感染BVDV非常普遍,用牛睾丸原代细胞生产疫苗,不可避免的会遭到BVDV 污染,污染了这种病毒,一是直接干扰猪瘟病毒在细胞中的增殖,同时还会由于使用污染的疫苗造成BVDV 疾病的传播,直接影响胎儿存活,有试验证明:BVDV感染也可导致仔猪对猪瘟疫苗的免疫耐受。猪瘟活疫苗(细胞源)的生产均采用牛睾丸原代细胞制造,由于使用异源原代细胞培养,批间差异较大;且培养过程中抗原损失量较大,病毒培养液中病毒含量不高;再加上BVDV 的污染,对疫苗的稳定性和纯净性影响极大。
         猪瘟活疫苗(兔源)是利用兔子组织来制作疫苗,由于兔只饲养量有限和兔只对猪瘟病毒的敏感性也在下降,这些对兔源疫苗的产量和稳定性都有较大的影响。
         猪瘟活疫苗(传代细胞源)采用国际认证的同源性传代细胞培养,批间差异极小,稳定性好,病毒培养过程中抗原损失很少,病毒培养液中病毒含量高,而且避免了其他病毒污染的威胁,相对目前其他两种猪瘟疫苗来说是一种新型优质的疫苗。

传代细胞系与牛睾丸原代细胞培养制备猪瘟活疫苗的比较分析

  传代细胞系培养 牛睾丸原代细胞培养
免疫原性 传代细胞系培养,疫苗毒株的免疫原性衰减极少,免疫原性极其优秀 牛睾丸原代细胞培养,疫苗毒株的免疫原性衰减较多,免疫原性良好。
纯净性 传代细胞系培养,可避免细胞污染外源微生物的可能。 目前我国牛群 BVD/MDV比较普遍,用牛睾丸原代细胞制苗,存在外源病毒等微生物污染的危险。
稳定性 传代细胞系培养,生产工艺极其稳定,质量易控,批间差异极小。 牛睾丸原代细胞培养,批间差异大,给疫苗产量、效力的提高带来困难。
病毒产量 传代细胞系培养,猪瘟病毒滴度可达100万倍以上 牛睾丸原代细胞培养,猪瘟病毒滴度仅在5万倍左右
过敏反应 传代细胞系培养,后期采用低血清培养,血清含量极微,大大降低因血清等异源蛋白引起的过敏反应。 牛睾丸原代细胞培养物,由于存在一定量的血清和少量的细胞碎片,可能存在因异源蛋白引起过敏反应的风险。

        1.通过猪瘟活疫苗(传代细胞源)与猪瘟活疫苗(细胞源)免疫效果对比试验,评估猪瘟活疫苗(传代细胞源)的免疫效果在河南省郑州市选择一个饲养管理水平良好的种肉猪配套场,进行不同疫苗免疫效果比较试验,随机选取150头种猪,分成三组,每组50头,用猪瘟活疫苗(传代细胞源)1头份/头和国内两个厂家生产的猪瘟活疫苗(细胞源)5头份/头,各免疫一组,分别在免疫前和免疫后30天抽取部分免疫猪的血样,分离血清,用美国IDEXX公司的猪瘟抗体检测试剂盒检测其抗体,结果见表1、图1。

表1种猪免疫三种猪瘟疫苗30天前后猪瘟抗体水平的分布

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图1  三组试验种猪免疫前后两次血样猪瘟抗体离散度和猪瘟抗体平均值

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        结果显示,在免疫猪瘟疫苗前3个组猪的抗体平均值和离散度都相差不大,免疫后30天两个猪瘟活疫苗(细胞源)组的抗体水平与免疫前比较变化不大,而免疫猪瘟活疫苗(传代细胞源)组在免疫后30天的抗体合格率则有明显的提高(从74%上升到85%),抗体平均值也有一定的提高(阻断率为0.5上升到0.6),抗体水平较均一(抗体离散度从37%下降到31%,减少了6个百分点)。

        2.通过广东不同地区的四个猪场免疫猪瘟活疫苗(传代细胞源)后种猪的免疫效果试验,评估其临床应用免疫效果在广东省广州市(猪场A)、茂名市(猪场B)、佛山市(猪场C)和韶关市(猪场D)各选一个免疫猪瘟活疫苗(传代细胞源)的猪场,采取其免疫后30天的部分种猪的血样,分离血清,用美国IDEXX公司的猪瘟抗体检测试剂盒检测其抗体,结果如表2、图2。

表2  四个猪场免疫猪瘟活疫苗(传代细胞源)后猪瘟抗体水平分布情况

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图 2  四个猪场免疫猪瘟活疫苗(传代细胞源)后猪瘟抗体离散度和猪瘟抗体平均值抗体水平分布情况

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        结果显示,种猪免疫猪瘟细胞活疫苗(传代细胞源)后猪瘟抗体的合格率保持在 90%以上, 80%以上的抗体水平达到了比较高的滴度(阻断率 ≥60%),而根据美国 IDEXX公司的数据显示,猪瘟抗体的阻断率在 60%~ 80%是最理想的滴度,说明猪瘟活疫苗(传代细胞源)对种猪群有很好的免疫效果。

二、通过猪瘟活疫苗(传代细胞源)防控和净化猪瘟的具体方案
         本方案通过对猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫猪群的猪瘟抗体的监测,根据检测结果淘汰不合格母猪,达到防控和净化猪瘟的效果。
         1.试验用疫苗与用量
          1.1猪瘟活疫苗(传代细胞源):由广东永顺生物制药股份有限公司生产。
         2.抗体检测方法:采用 IDEXX-ELISA试剂盒进行检测。
         2.1操作方法按试剂盒的使用说明。
         2.2判定标准
         猪瘟抗体检测试验(阻断 ELISA)成立条件:阴性对照的平均 OD450值应大于 0.50,阳性对照的阻断率应大于 50%,试验方成立有效。样品阻断率=(阴性对照平均 OD450值-样品 OD450)/阴性对照平均OD450×100%

        被检样品的阻断率大于或等于 40%,该样品为猪瘟抗体阳性;样品阻断率小于或等于 30%,该样品为阴性(无猪瘟抗体存在);样品阻断率在 30~40%,该样品为可疑。
         3.试验方法

        技术路线:

route-30893         猪场的全群种猪采样用阻断 ELISA方法检测其猪瘟抗体,阻断率在 55%以上的猪只按猪场的正常措施管理,间隔 4-5月全群复查一次;检测阴性和阻断率在 55%以下的猪只用猪瘟活疫苗(传代细胞源)加强免疫一次,免疫后 45天采血检测,阻断率在 55%以上的猪只按猪场的正常措施管理,间隔 4-5月全群复查一次,淘汰检测阴性的猪只。利用猪瘟活疫苗(传代细胞源)防控和净化猪瘟,可以有效促进猪体健康,保障人民群众的食品安全;提高猪场的生产力,显著增加经营者的经济效益,保证我国养猪业的快速健康发展。

 

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