分泌型免疫球蛋白A（Secretory IgA，SIgA）是粘膜免疫中主要的效应因子[1]，它不仅具有中和病毒、抑制微生物吸附的作用，还具有免疫排斥及促天然抗菌的功能。小肠粘膜中除了含有大量的免疫细胞外还存在大量的神经元和丰富的神经内分泌细胞[2]，它们在粘膜中主要呈弥散性分布，相互之间在空间上密切联系，是一个高度特化的神经内分泌免疫调节的部位[3]。Berczi[4]认为神经内分泌系统是免疫反应最有力的调节者。生长抑素（Somatostatin，SS）是一种神经多肽，对体内免疫反应具有广泛的抑制作用，不仅可抑制T淋巴细胞的活动，还可抑制淋巴细胞免疫球蛋白的合成，尤其是对IgA合成的抑制作用可达20%~50%[5]。 但生长抑素细胞与IgA细胞是以一种怎样的状态同时存于小肠粘膜中，发挥对小肠粘膜免疫的调节作用，一直未有这方面的报道。本实验首次采用两种免疫组织化学方法（ABC法和SPA-HRP间接染色法）相结合分别显示小肠中的生长抑素（SS）阳性细胞和IgA阳性细胞，研究了SS细胞和IgA细胞在鸡小肠中的共存性，为进一步探索神经内分泌系统和免疫系统之间如何相互作用提供了形态学基础。
1 材料与方法
1.1 样品制备 采取正常鸡十二指肠，直接放入液氮罐，然后再转移至-30℃冰箱保存。1.2 试验试剂 兔抗人生长抑素多克隆抗体，ABC染色试剂盒（均购自北京中山生物技术有限公司）；兔抗鸡IgA多克隆抗体（本实验室制备）；冻干辣根过氧化物酶联葡萄球菌A蛋白纯品（SPA-HRP，购自卫生部上海生物制品研究所）；DAB（购自Sigma公司）。1.3 冰冻切片的制作 应用LEICA CM-1850型号冰冻切片机制作切片，切片厚12μm，放入新鲜配制的4%多聚甲醛中固定10min。1.4 免疫组织化学染色程序（ABC法） 固定过的冰冻切片；PBS漂洗10min；0.6%过氧化氢中30min；含0.4%Triton-100的PBS漂洗20min；5%正常羊血清20min；兔抗人SS抗体（工作浓度1∶250）4℃放置24h；含0.2%Triton-100的PBS漂洗3次，每次10min；生物素标记的羊抗兔IgG（ABC试剂盒）37℃孵育70min；含0.2%Triton-100的PBS漂洗3次，每次5min； ABC复合物（ABC试剂盒）37℃孵育40min；PBS洗2次，每次3min；Tris-HCl缓冲液中15min；DAB显色5min。PBS洗2次。1.5 免疫组织化学染色程序（SPA-HRP间接染色法） 将ABC法显色后的切片，按照下列程序反应：0.3%双氧水中15min；含0.2%Triton-100的PBS中洗3次，每次5min；5%正常羊血清封闭20min；兔抗鸡IgA抗体（工作浓度1∶40）4℃放置过夜；PBS漂洗2次，每次5min；含0.2%Triton-100的PBS中洗5min；SPA-HRP（工作浓度1∶40）37℃放置1h；PBS漂洗3次，每次5min；醋酸缓冲液中15min；DAB-NiCl2-H2O2显色5min。PBS洗2次，蒸馏水洗一次，甲基绿复染，切片自然干燥后，中性树胶封片。切片在Olympus BH-2显微镜下观察，拍照。1.6 对照实验 ABC法中，用0.02mol/L PBS代替兔抗人生长抑素多克隆抗体；SPA-HRP间接法中，用0.02mol/L PBS代替兔抗鸡SIgA抗体，其余步骤均相同。
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本文全文刊于本杂志2012年5月刊，可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章，作者：刘 少娟，如若转载，请注明出处：http://zgdwbj.com/archives/10085
