专业知识 | 血清学反应的一般认识

血清学检测方法具有效率高、专一性强、灵敏度高、适用性广等优点，可用于样品批量化检测。但由于检测过程中易受人员操作和检测环境影响，会经常出现假阳性或假阴性反应，降低检测的准确度。

（2）抗原抗体的结合是分子表面的局部结合，这种结合方式通常情况下比较稳定，但在一定条件下能发生可逆反应。

（3）抗原抗体反应属于需遵循一定的量比关系，因此两者的结合达到合适的量比后，才能出现可见反应。

（4）血清学反应大致可分为两个阶段进行，但两者之间的划定并没有时间界定。首阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度较快，短时间内即可完成，但并未出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原抗体反应的可见阶段，一般表现为凝集、沉淀、补体结合反应等，此反应阶段速度慢，需要较长时间。但在第二阶段反应中，离子浓度、温度、湿度等其它环境因素都直接影响血清学反应的结果。

2.1凝集反应

凝集反应将颗粒性抗原，如完整的细菌细胞、螺旋体或红细胞等能与相应的抗体结合，在一定的条件下，经过一定时间后肉眼可见凝集小块，此过程称为凝集反应。反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。其中包括直接凝集反应和间接凝集反应。

2.1.2直接凝集反应

直接凝集反应指颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应。

（1）玻片凝集法是一种定性检测方法，通常用于鉴定菌种、血型。如将含有抗体的血清与待检液各一滴在玻片上，使两者混匀，数分种后如出现肉眼可见的凝集块，即为阳性反应。此方法快速、灵敏，但不能进行定量测定。其原理是抗原抗体可以发生特异的反应，主要用已知抗体来测定未知抗原。

（2）试管凝集法是一种定量检测方法，通常用于某些传染病的诊断和流行病学调查。其原理主要用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。若要测定抗体的效价，可将待检查的血清用稀释液稀释成不同浓度，再加入定量的抗原，温育数小时后观察，血清在最高稀释度仍能出现明显凝集现象的，即可判定为该血清的凝集效价。

2.1.3间接凝集反应

将可溶性抗原或抗体先吸附在与免疫无关的一种颗粒状微球表面上，然后再与相应抗体或抗原相互作用，同时在电解质环境中可发生凝集，称为间接凝集反应。一般载体能增大了可溶性抗原的反应面积，当载体上有少量抗原或抗体就能发生结合，并出现肉眼可见的反应。

2.2沉淀反应

在一定量电解质存在下，经过一定时间，可溶性抗原与相应的抗体结合，产生肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中的抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。沉淀反应与凝集反应的机制基本相同，沉淀原分子小，单位体积内抗原含量较多，在测定时，需将抗原稀释，由于在单位体积内抗原量多，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，检测后抗原稀释度为沉淀反应的效价。

2.2.1环状沉淀反应

环状沉淀反应是一种定性检测方法，可用已知抗体检测待检抗原。将已知抗体加入特制的小试管中，而后沿管壁慢慢加入等量抗原，若抗原与抗体互相结合，则在两液界面处出现明显的白色圆环。

2.2.2絮状沉淀反应

将已知抗原与抗体在试管或凹玻片中混匀，如抗原抗体互相结合，同时两者者的比例适当时，会出现肉眼可见的絮状沉淀，该反应为阳性反应。

2.2.3琼脂扩散试验

可溶性抗原抗体在半固体琼脂内可以扩散，如抗原抗体相互结合，同时两者的比例合适，在其扩散的某一位置就会呈现白色的沉淀线。琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种方式。单向扩散是一种定量检测方法，常用于免疫蛋白含量的测定。而双向扩散常用于定性试验，一般用于测性分析及复杂抗原的成分鉴定。

抗体反应主要受抗原的来源、抗体的浓度、抗体的特异性与亲和力等因素影响。

4.2抗原

抗原其理化性状、所含抗原决定簇的数量及种类均可影响血清学反应的结果。

4.3电解质

特异性抗原与抗体表面均带有很多极性功能团，它们相互结合而失去亲水性，变成疏水结构。此时易受电解质作用失去电荷而相互靠近，发生凝集或沉淀反应。所以，在适当浓度的电解质参与下，才使抗原抗体复合物出现可见的沉淀或凝集现象。在检测过程中，一般用生理盐水或8%—10%高渗盐水作为电解质将待检样品进行稀释。

4.4温度

抗原抗体反应的温度适应范围一般在15~40℃内均可正常进行，高于56℃，可使抗原抗体复合物解离甚至变性甚至裂解。温度高，可使抗原与抗体分子动能增大而增加碰撞接触的几率，使结合反应的快速出现；相反温度低，若要达到反应结合充分，则需要延长反应时间。

4.5 酸碱度

血清学反应一般在pH6～8下进行，强酸或强碱都可使复合物解离，除此之外，pH值达到复合物等电点时,可产生非特异凝集或沉淀。

4.6反应时间

时间因素主要由反应得快慢来表现，实验过程中不同时间观察反应情况可能会看到不同的结果。因此，反应时间是由抗原抗体性质、反应条件、反应环境相等因素所决定的。