氟苯尼考双混悬型乳剂对猪沙门氏菌病的疗效试验

仔猪副伤寒( Paratyphus suum) 主要由猪霍乱沙门菌( S. cholerasuis ) 、猪伤寒沙门菌( S. typhisuis) 、鼠伤寒沙门菌( S. typhimurirum) 、德尔陴沙门菌( S. derby ) 和肠炎沙门菌(S. enteritidis) 等几种常见的沙门氏菌血清型引起[1]，其中最主要的是猪霍乱沙门氏杆菌和鼠伤寒沙门氏菌，该类病原菌主要侵害1~4月龄仔猪，是一种较常见的传染病。发病时常引起高死亡率（败血型90% , 慢性型25%~50%）， 并且该病时常与其他病毒性疾病（猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒等）或其他细菌性疾病（大肠杆菌病、副猪血杆菌病、胸膜肺炎放线杆菌病等）混合感染而造成更高的死亡率，对生猪生产造成了很大的损失[2]。目前，还没有有效的预防猪感染沙门氏菌的发生措施，主要依赖加强消毒措施和饲养管理，在源头净化，仔猪出生1个月注射猪副伤寒菌苗可以起到一定的预防效果，治疗药物主要是氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类和氟喹诺酮类[3,4]。　　酰胺醇类动物专用药氟苯尼考为广谱类抗生素，针对多种临床常见病原菌均有较好的治疗效果[5]。氟苯尼考双混悬型乳剂（DSEF）由湖南农业大学兽药研究所、湖南省兽药工程技术研究中心及武汉天种科学研究院创制[6]，李孝文等[7]关于氟苯尼考双混悬型乳剂的体外药效学进行了较全面的研究，发现该氟苯尼考新制剂在体外能够减小鼠伤寒沙门氏菌的耐药几率，明显延长对该细菌的后效应时间，从而有效地提高其抗菌效果。本试验通过人工感染鼠伤寒沙门氏菌建立保育猪沙门氏菌病理模型，以氟苯尼考注射液为药物对照，进行氟苯尼考双混悬型乳剂的治疗评价研究，为其临床应用提供理论依据和试验指导。
1 材料与方法
1.1 材料1.1.1 药品及试剂　　20%氟苯尼考双混悬型乳剂、20%氟苯尼考注射液均由本课题组研制；琼脂粉（批号100225）、蛋白胨（批号080410）上海蓝季科技发展有限公司；酵母粉（批号20110801）上海源叶生物科技有限公司；麦康凯琼脂（批号20090528）北京奥博星生物技术有限责任公司。1.1.2 菌种及血清　　鼠伤寒沙门氏菌（S. typhimurium）C77-31，中国兽医药品监察所；沙门氏菌A-F多价血清，杭州天和微生物试剂有限公司。1.1.3 仪器　　超级洁净工作台（DL-CJ-1N型）北京东联哈尔仪器有限公司；生化培养箱（HPS-250型）哈尔滨市东湖医疗器械有限公司；冷冻离心机（Z323K型）德国Hermle公司；电子天平(AY22O型)日本Electronic Balance公司；微量移液器，德国艾本德公司。1.1.3 试验动物　　健康大约克小肥猪70头，体重12±1.5kg，均有武汉天种畜牧有限公司提供。正式试验前观察1周，记录耳号，选取血清学试验沙门氏菌抗体阴性的猪只，饲喂该生长阶段的全价无抗菌药添加的饲料，自由饮水。1.2 方法[8-10]1.2.1 菌液培养　　取冻干菌种，接种于LB液体培养基中于37℃培养18 h涂麦康凯琼脂划线、验纯并分离接种于LB液体培养基，37℃培养18h，平板计数法确定细菌数量，根据结果决定攻菌量。1.2.2 最小致死量测定[11]　　随机取7头猪，分为3组，用不同数量的鼠伤寒沙门氏菌液分别接种试验猪，观察和记录各试验组猪只的临床表现：精神状态，饮食情况，排便情况和呼吸变化以及死亡的时间等情况，观察并记录7d，对死亡猪剖检并取新鲜的肠系膜淋巴结、脾、肝、肾等病料，无菌涂麦康凯琼脂平皿检查是否有鼠伤寒沙门氏菌，与此同时使用沙门氏菌A-F多价血清试剂进行血清学鉴定。根据试验组发病和死亡的具体情况综合确定该细菌对猪只的最小致死量。1.2.3 分组情况　　选择上述大约克小肥猪60头，每组10头，随机分为6组并隔离饲养。所有猪只均给予饲喂基础日粮，自由饮水。设立低剂量组（10mg/kg·bw）、中剂量组（20mg/kg·bw）和高剂量组（30mg/kg·bw）的20%氟苯尼考双混悬型注射乳剂试验组，同时设立健康对照组、感染对照组以及药物对照组。每种试验药品组均为肌肉注射， 采用72h/次，连用2次的程序，药物对照组按20mg/kg·bw肌肉注射20%氟苯尼考注射液（FI），采用48h/次，连用3次的程序，停药后观察3天。相关分组情况见表1。1.2.4 人工感染及给药方式 　　将试验组用含菌量为7.5×108cfu/mL的鼠伤寒沙门氏菌菌液按5mL/头的用量经口接种。阴性对照组口服接种5mL/头0.9%氯化钠注射液。人工感染6h左右，发现2～6组部分猪只出现精神稍沉郁等非健康状态时，使用DSEF和FI按照试验分组情况肌注治疗，持续观察至人工感染后15d。具体处理情况见表1。
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本文全文刊于本杂志2012年6月刊，可从知网下载或向本刊订阅。