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学术研究

曾用该测试片进行食品检样，结果显示，Petrifilm TM 3.1 聚合酶链反应 （PolymeraseChainReaction,
检出率达 93.3%。 PCR）
2 免疫学检测方法 该方法克服了传统检测方法的不足，近年来发

利用抗原与相应抗体特异性结合为理论基础 展比较迅速且被多种领域所应用。国外最早采用
进行金黄色葡萄球菌的检测，操作简单，特异性强， PCR 方法从食品中检测金黄色葡萄球菌的报道是
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灵敏度高，适用于大批量样品的检测。 在 1991 年，WILSON 等 采用该方法， 8h内即可检
2.1 酶联免疫（ Enzyme-LinkedImmunosorbent 出人工污染的干燥脱脂奶中的金黄色葡萄球菌肠
Assay,ELISA）技术 毒素 B 和 C1，靶 DNA 检出限达到 1fg （<10 个细
ELISA 法是免疫诊断中最常用的方法，在进行 胞），灵敏度非常高。该方法由高温变性、低温退火
金黄色葡萄球菌的检测中常采用“夹心法”。 （复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环
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Schotte 曾报道一种改良的 ELISA 方法——快速免 进行，使目的 DNA 得以迅速扩增。李秀娟等 人曾
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疫色析手工操作法，能够在 15min 之内检测 500 利用 PCR 对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶 （nuc）保守
pg/mL 的金黄色葡萄球菌肠毒素。但是 ELISA 法也 区域进行扩增并进行特异性检测，结果显示用 PCR
存在一些缺陷，试验中所用到的试剂选择性高，价 法检出的阳性率为 37.5%，而传统细菌分离培养法
格昂贵，易受环境、温度、时间等条件的影响。 检出的阳性率为 31.3%。但是，PCR 技术也有一些弊
2.2 免疫荧光（ ImmunofluorescenceAssay,IFA） 病，如试验费用高，试验技术要求较高，不适合向基
技术 层推广。
根据抗原抗体特异性结合的反应特点，将已知 3.2 核酸探针技术
抗体与荧光色素以化学方法结合制成荧光标记物， 该技术具有快速、灵敏、特异性强等优点。
在特定条件下，使样品与其发生结合反应，之后在 Noterman 等人最早应用于检测金黄色葡萄球菌肠
荧光显微镜下观察是否有荧光标记的抗原抗体复 毒素的方法。其原理是利用了核苷酸碱基序列互补
合物存在，若存在则证明该样品含有金黄色葡萄球 的原则，用特异的 DNA 探针通过核酸分子杂交来
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菌。1991 年， Rowe 等 用免疫荧光法分别达到了检 检测未知样品的抗原。近年来， GeneTark 推出检测
测出混合样品中高分子量的金黄色葡萄球菌肠毒 金黄色葡萄球菌的探针， 采用浸染棒比色法，敏感
素和低分子量的金黄色葡萄球菌肠毒素的目的。 性达 100%，假阳性率为 9.3%，人工感染样品中
2004 年，TimAlefantis 开发出一种基于免疫双抗体 没有假阳性结果发生 [14] 。但是该技术操作也较繁
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夹心荧光法的快速检测金葡菌肠毒素的方法，相比 琐、费时。

传统方法，检测时间大大缩短，全程需 40～50min。 3.3 基因芯片技术
2.3 反向被动乳胶凝集试验 （ReversePassiveLatex 基因芯片技术是近年来才迅速发展起来的一
Agglutination,RPLA） 种反向固相杂交的高新技术，具有高通量、快速、灵
RPLA 法是采用间接凝集反应的原理，将特异 敏的特点，其原理是设计一种检测金黄色葡萄球菌
性抗体吸附于乳胶颗粒上，当抗原抗体发生特异性 的寡核苷酸探针，以一定方式固定在硝酸膜上，制
结合时，乳胶发生凝集反应，其凝集程度与待测样 成基因芯片，利用引物对靶基因进行扩增和标记，
品中细菌含量成正比。法国梅里埃公司的 Slidex 并与基因芯片在适当条件下杂交，根据杂交结果鉴
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Staph-kit 在检测样品时， 20s即可读出结果 。 定金黄色葡萄球菌是否存在。李秀萍等 人曾利用
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Trisum 公司的 AureusTsetTM 则 1min 内可观察结 该技术对奶牛乳房炎主要致病菌进行检测，特异性
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果 。RPLA 虽简单易行，但是致敏的乳胶易发生自 较好，准确率高，可操作性强，为临床治疗提供有力
凝，从而影响反应的灵敏度，造成检测结果不准确， 的依据。
另外，该方法只能检测金黄色葡萄球菌的肠毒素。 3.4 环介导等温扩增技术(Loop-mediated
3 分子生物学检测 isothermalamplification，LAMP)