猪病的实验室诊断技术

作者：高鹏

近些年我国养猪业蓬勃发展，整体模式还是以散养户和小规模养殖场结合为主。养殖技术参差不齐，疾病的流行也是呈现多样化的趋势。老的传染病死灰复燃、新的疾病层出不穷、多种疾病混合感染的案例不断出现。过去兽医依靠经验能对疾病做出初步诊断，但现在疾病的临床表现呈现多元化、非典型性病例时有发现，仅凭临床症状和流行病学很难对疾病做出准确的诊断。并且临床诊断具有滞后性，一旦猪场出现疾病大规模流行、到了临床症状非常明显的阶段，再想控制就比较困难了。近些年，国内外越来越重视猪病的实验室诊断技术，不但可以快速、准确的诊断疾病以便合理用药，还可以对于潜伏期的疾病做出预警，评估猪群疫苗接种效果、了解母源抗体水平等，为猪场的安全生产保驾护航。

1 实验室检测技术介绍

1.1 涂片镜检及病原体培养实验

通过提取血液、尿液、痰液及组织等，涂抹在玻片上，在显微镜下观察细菌等病原体。通过革兰氏染色还可以区别革兰氏阳性或阴性细菌的感染。涂片镜检实验方法简单、仅需要显微镜就可实验、可用于疾病的初期判断。病原体培养实验是一种体外人工繁殖病原体的技术，选取病料接种在培养基上、37 ℃生长12~24 h、通过菌落形态及生化反应来判断结果。分离培养的菌株还可以进一步做药敏实验，通过抑菌试验筛选出敏感性强、疗效好的抗菌药物进行治疗。仔猪黄白痢等疾病通过细菌培养比较好判断，而副猪嗜血杆菌、传染病胸膜肺炎放线杆菌等较难判断，并且越来越多的猪只混合感染、需要结合其他实验方法进一步诊断。

1.2 聚合酶链式反应（PCR）

通过扩增放大特定的DNA片段来检测微量病原体的技术。伪狂犬、蓝耳病、乙脑、传染性肠胃炎、轮状病毒、猪瘟等都可以应用PCR方法检测。该方法灵敏度高、适用于疾病的早期诊断。但该实验方法操作复杂、技术要求高、需要专门的实验室、不适用于基层开展。

1.3 酶联免疫吸附实验（ELISA）

将抗原或抗体包被在聚乙烯微孔板上、加入待检标本进行抗原抗体反应、洗脱后加入辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶标记的二抗进行反应、洗脱后加入底物夜进行显色反应、通过颜色变化或者酶标仪来读取结果。ELISA实验是一种比较经典的实验室方法，包括间接法、双抗原夹心法、捕获法等，开用于病原体及血清抗体的测定，即能定性也能得出定量结果，现在市场上有多种商品化的试剂盒供选择。但ELISA实验操作需要有相应的仪器设备如孵育箱、洗板机、酶标仪等，并且ELISA实验操作比较繁琐、实验过程需要1-2个小时、不适用于单个标本的检测。

1.4 胶体金实验

将抗原或抗体结合在胶体金颗粒上边，与待检血清结合、在醋酸纤维膜载体上形成显色反应的一种技术方法，主要有层析法和渗滤法。胶体金检测方法可用血清、全血标本，不需要特殊的仪器设备、可以实现单个标本现场检测，敏感性和特异性也不错，试剂稳定性好、一般可以室温保存。

1.5 血凝实验

某些病毒的血凝素能够选择性的使动物红细胞发生凝集，当特异性的抗体与相应病毒结合使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。该实验方法可用于口蹄疫、流感、细小病毒、副猪嗜血杆菌、乙脑等疾病的诊断。但血凝实验操作复杂、技术要求高，需要一定条件的实验室才能开展。

2 实验室检测技术用途

2.1 疾病诊断

通过病原体的检测及血清抗体的检测可以了解猪只的健康情况，结合临床症状明确诊断疾病。对于早期控制、合理用药有着重要作用。

2.2 免疫效果观察

接种前，通过血清抗体测定可以了解猪只抗体保护水平、尤其是仔猪的母源抗体，这样就可以为猪只疫苗接种时间提供参考。接种后，检测血清抗体可了解猪群的疫苗接种效果，为免疫程序的制定和修改提供帮助。

3 实验室检测技术注意事项

3.1 病料的采集

不同类型的疾病病料采集和运输的方式也不太一样，怀疑细菌性疾病时要做到无菌采集、采集病料所用的刀、剪、镊子等用具须经严格消毒后方可使用。病毒性疾病要采集病毒集中的部位如淋巴结、脾脏、肾脏等。同时采样人员做好个人防护，必须戴好手套、口罩、帽子，穿好工作服等防护用品后才能进行采样操作，以减少被感染的机会。

3.2 结果假阳性和假阴性

实验室检查结果会出现假阳性和假阴性，即没有感染疾病的猪只得出阳性结果、感染疾病的猪只得出阴性结果。病料污染、实验室交叉污染、检测试剂质量问题等都会造成假阳性结果。假阴性的情况就比较复杂，如疾病的“窗口期” 、检测试剂的灵敏度、送检病料的采样时机和部位等都会对实验结果有影响。

总之，在猪病防控过程中，一定要有科学严谨的态度和方法，不能抱有侥幸心理。学习现代的猪病防治技术，学习剖检化验技术，不能仅凭猪身的外观变化，就乱下结论，盲目用药，从而造成猪病延误，药费增加，损失极大。有条件的养猪场可自行建立化验室，可对猪场疾病控制起到事半功倍的效果。规模小的猪场可选择适当的检测方法和试剂，或者与大的养殖场及科研单位建立联系、将标本送检。当然，实验室检测结果也不是100%准确的，也需要通过流行病学和临床症状综合判断。（编辑：狄慧）