细胞培养和细胞化学染色均已广泛应用于生命科学研究。培养细胞的细胞化学染色通常是将贴壁细胞培养于盖玻片上,即在细胞爬片上进行。这就排除了在体内组织中其他杂细胞成分的干扰。油红O为脂溶性,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料,但配制油红O染液的异丙醇具有挥发性[1],如果染片后不及时拍照封片,细胞胞浆内脂滴的颜色将会消褪变淡,形态出现皱缩,使试验结果难以保存。本文对脂肪变性的大鼠肝细胞爬片进行油红O染色,就不同的封片时间对脂质染色的细胞爬片保存效果的影响进行讨论。
1 材料和方法
1.1 实验动物 SD大鼠,雄性,100g~150g,清洁级,由河北省实验动物中心提供。1.2 主要试剂和仪器 RPMI-1640培养基,胎牛血清,胶原酶Ⅳ,DL-乙硫氨酸,油红O,分析纯,苏木色精。 二氧化碳恒温培养箱,超净工作台,倒置相差显微镜成像系统,光学显微镜成像系统,6孔细胞培养板。1.3 方法1.3.1 脂肪变性肝细胞爬片的制作 取成年SD大鼠,速眠新麻醉,采用二步灌流法获取肝细胞[2],铺于6孔板中,每孔放置一块灭菌的盖玻片,置于二氧化碳恒温培养箱中,培养24h。将贴壁生长良好的肝细胞用5.0mmol/L DL-乙硫氨酸处理,不换液培养48h[3]。 1.3.2 脂肪变性肝细胞油红O染色 48h后,盖玻片,用油红O染色[4],水洗,苏木精衬染,干燥,封片后光学显微镜成像系统观察拍照。
2 结果
位于肝细胞内的脂肪滴均呈深橘红色,肝细胞核呈蓝色。染色后立即封湿片的细胞爬片细胞边缘清晰,色泽鲜艳,结构显示细腻,极其细小的脂肪小粒也能清楚地观察到(见图1);而染色后充分干燥再封片的细胞爬片细胞色彩暗淡,表面出现皱缩皲裂,有些细胞边缘和脂肪小粒已模糊不清,并且胞浆内出现由于溶剂挥发而生成的染料沉淀(见图2),与前者比较有极显著差异。
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本文全文刊于本杂志2013年2月刊,可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章,作者:刘 少娟,如若转载,请注明出处:http://zgdwbj.com/archives/10670