由致病性大肠杆菌引起的仔猪黄痢和白痢,目前在国内大多数养猪场广泛流行,发病率和死亡率因饲养管理水平的不同有很大的差别,临床上主要采用抗菌药物进行治疗,但是传统的抗菌药物治疗易产生耐药菌株,大大增加了临床选药的难度。还会破坏机体的正常菌群,导致机体内的微生态平衡被破坏,增加了机体对外源感染的敏感性。抗菌药的长期使用,还会导致药物残留,严重威胁着动物源性食品安全[1-2]。在我国用中草药治疗疾病具有悠久的历史,本实验选取来源广泛的中草药根据中兽医理论,以地锦草为主药组成6种组方进行体外抑菌试验,现将试验情况报告如下:
1 材料与方法
1.1 供试材料1.1.1 供试中药 地锦草、黄连、黄芩、黄柏、黄精、甘草、金银花、白头翁、马齿苋、秦皮、石榴皮、黄芪、葛根、金银花、诃子等均购自金华市医药公司。1.1.2 培养基 普通营养肉汤、普通营养琼脂、麦康凯营养琼脂(由北京奥博星生物技术责任有限公司生产)。1.1.3受试菌株 猪源致病性大肠杆菌O20、O48和O161来自金职院农学院动物微生物实验室,从临床患病仔猪尸体中分离经中监所鉴定并保存的优势菌株各1株。1.1.4主要仪器设备 煎药器、隔水式恒温培养箱、光学显微镜、超低温冰箱、数显恒温水浴锅、电子天平等等。1.2 方法1.2.1中药组方 组方Ⅰ:地锦草3份、白头翁2份、黄柏1.5份、黄连2份、秦皮为1.5份; 组方Ⅱ:地锦草3.5份、黄连 1.5份、黄芩 1.5份、黄柏 1.5份、 马齿苋2份; 组方Ⅲ:地锦草2份、黄精1.5份、马齿苋1.5份、粉葛1份、黄芩1份、白头翁1份、甘草0.5份、诃子1份、黄连0.5份; 组方Ⅳ:地锦草2.5份、黄精1.4份、穿心莲0.5份、白头翁0.7份、大青叶0.5份、黄芩0.5份、银花0.5份、连翘0.5份、甘草0.5份、黄柏1份、秦皮0.7份、黄连0.7份; 组方Ⅴ:地锦草3份、黄柏1.5份、黄连1.5份、黄精2份、石榴皮2份; 组方Ⅵ:地锦草4份、黄柏2份、黄连2份、黄精2份;1.2.2中药水煎剂的制备 每种方剂均按水提法进行制备,以组方Ⅰ为例,称取地锦草30g、白头翁20g、黄柏15g、黄连20g、秦皮15g,装入煎药器中,加1000 mL蒸馏水浸泡30min后,先用武火加热至沸后文火煎煮30min,用4层纱布过滤,滤出煎液,然后将药渣按上述方法再煎煮一次,合并两次滤液,滤纸过滤,恒温水浴加热浓缩至生药含量为1 g/mL,高压灭菌后,置4℃冰箱保存待用。1.2.3培养基制备 普通营养肉汤、普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基均按厂家说明书配制,4℃冰箱保存待用。1.2.4致病性大肠杆菌的培养 将菌种接种于麦康凯琼脂培养基上,37℃培养24h,挑取典型菌落接种于普通肉汤培养基中,置37℃培养24h后,取各菌液0.5 mL接种于普通营养琼脂平板上培养8~12h后,用L棒刮取菌苔,用灭菌生理盐水稀释至含菌量5×104~5×105 CFU/mL备用。1.2.5抑菌试验 最小抑菌浓度(MIC)测定,用试管二倍稀释法稍做改进。以组方Ⅰ为例,取灭菌试管10支,依次编号,每管先加入灭菌肉汤培养基1.0 mL,然后于第一管中加入制备好的中药水提液1.0 mL,混匀后取出1.0 mL放入第二管,依此类推至第9管,弃掉1mL,第10管不加药物,作为阳性对照,重复制备三套管,取一套重复管不加细菌稀释液用于阴性对照管,另二套重复管一套备用一套做重复实验用。取制备好的细菌稀释液0.1 mL分别加入上述1至10管中混匀,使第1管至第9管药物浓度(mg/mL)分别为500、250、125、62.50、31.25、15.60、7.80、3.90、1.95。置各管于恒温培养箱中37℃培养24h,观察结果。阳性对照细菌生长,呈均匀浑浊状,阴性对照管无细菌生长呈澄清、透明状时,试验成立,观察其它各管情况。1.2.6抑菌试验结果的判断
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本文全文刊于本杂志2012年10月刊,可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章,作者:刘 少娟,如若转载,请注明出处:http://zgdwbj.com/archives/10669