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吕梁地区规模化鸡场新城疫抗体水平监测

  鸡新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,发病急、传播快、死亡率高,发病率可达90%。临床上常见呼吸困难,拉水样或黄绿色粪便,产蛋鸡产蛋量急剧下降,软壳蛋、畸形蛋明显增多。鸡只接种新城疫疫苗后体内会产生特异性抗体,借助间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA),可对血清中新城疫抗体水平进行检测,有效评估鸡群的免疫状态。为摸清吕梁地区规模化鸡场新城疫抗体水平,笔者2012年5月对吕梁地区58个规模化鸡场的新城疫抗体进行了血清学监测,现将试验情况报告如下。
  1 材料与方法
  1.1 血样的采集  对吕梁地区58个存栏1万羽以上的规模鸡场鸡只随机采血,每只2mL翅下静脉血样,共采集血样1192份。其中文水17个鸡场332份,汾阳29个鸡场502份,临县12个鸡场358份。  1.2 血样的处理  采集的血样倾斜静置1h,待析出血清后,2000r/min离心8~10min,取上层血清待检。  1.3 仪器与试剂  单道、多道微量移液器;吸头;DNM-9602酶标分析仪,北京普朗新技术有限公司生产;新城疫病毒抗体检测试剂盒,北京维德维康生物技术有限公司生产,批号:120202。  1.4 试验方法与原理  1.4.1 试验方法 间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)  1.4.2 原理 特异的NDV被包被在96孔平底聚苯乙烯ELISA上。在反应过程中,检测样本被加入反应孔中,样本中的特异性抗体会与孔中包被的特异性抗原反应,在洗板的过程中不会被清洗掉,当添加酶标复合物时,这些酶标复合物就会与鸡血清的抗体发生反应。没有结合的酶标复合物在洗板的过程中被清洗。再加入底物显色,显色的深浅与样本所含NDV的抗体浓度成正比。  1.4.3 操作步骤 样本稀释:将被检血清用稀释液做1∶100稀释。加样:除A1、B1、C1、D1孔不加样本,留作空白调零,阴性血清和阳性血清做对照各占1孔外,其余孔加1∶100稀释的被检血清,每孔100μL,将加样位置做好记录,反应板盖上膜,置37℃环境下作用30min后洗涤3次。加酶标抗体:除A1、B1、C1、D1孔外,其他每孔加酶标抗体液100μL,反应板盖上膜,置37℃环境下作用30min后洗涤3次。加底物:加底物使用液,每孔100μL,置室温避光显色2min~3min。终止:加终止液,每孔100μL,使其终止反应。
  
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本文全文刊于本杂志2013年1月刊,可从知网下载或向本刊订阅。  
  

声明:本文为原创,作者为 刘 少娟,转载时请保留本声明及附带文章链接:http://zgdwbj.com/archives/10602

最后编辑于:2013/8/11作者: 刘 少娟

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