随着人们生活水平提高，“安全”、“无公害”、“绿色”食品已成国民普遍共识。肉鸡养殖量越来越大，养殖技术普及、养殖条件改善未能跟上其增长速度，导致肉鸡养殖过程中疾病严重发生。广泛、频繁、大量使用抗生素成为肉鸡养殖解决疾病的无奈选择，细菌耐药性随之产生，耐药菌的产生不仅增大治疗成本，危害人类健康，还常常导致“超级药菌”的出现。因此，本试验对大连地区禽源大肠杆菌的耐药性进行调查，旨在指导兽医临床选择敏感药物，规范使用药物，避免临床上滥用药。
1 材料与方法
1.1材料1.1.1 病料 大连地区各乡镇养殖场（户）送检病、死鸡。1.1.2培养基 麦康凯培养基、伊红美兰培养基、普通营养琼脂培养基、LB肉汤培养基均购自国药集团上海化学试剂有限公司。1.1.3 生化试剂 M-R试剂、V-P试剂，吲哚试剂，硝酸盐还原试剂等由蓝海实验室提供。生化试剂：乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露糖、葡萄糖均由杭州微生物试剂有限公司生产。蛋白胨自制（做无菌鉴定后，置冰箱中保存备用）。1.1.4标准药敏片 均购自中国兽医药品监察所。1.1.5仪器设备 恒温培养箱，THZ-82气浴恒温振荡器，高压灭菌锅，海尔生物安全柜（HR40-ⅡA2），显微镜等。1.1.6 菌株 109株大肠杆菌来自临床分离、标准质控菌购自中国兽医药品监察所。1.2 方法1.2.1 染色镜检 取病死鸡的新鲜心脏、肝脏、肾脏等脏器涂片进行革兰氏染色，镜检。1.2.2细菌分离、鉴定 分别取病死鸡的心脏、肝脏、肾脏，用点燃的酒精棉杀死表面杂菌，然后用灭菌剪刀在灭菌部位剪开小口，用灭菌接种环在小口深处挑取少量组织，分别接种麦康凯培养基、伊红美兰培养基，37℃培养24h[1]。用灭菌的接种环挑取麦康凯培养基上的粉红色菌落，伊红美兰培养基上的金属光泽菌落，进行纯培养。1.2.3生化试验 将上述培养特性、形态，染色符合大肠杆菌培养特性的菌株，在普通培养琼脂斜面上纯化、增菌，采用糖发酵试验（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖）、尿素分解试验、吲哚试验、MR-试验、V-P 试验进行生化鉴定、枸橼酸盐试验[2,3]。1.2.4 药敏试验 取保存的109株细菌0.1mL滴入109个普通营养琼脂平板，用灭菌的接种环均匀涂布每个平板，用镊子均匀贴上标记的14种药敏纸片，并作3个平行对照，37℃培养18-24h，精密测量抑菌圈的直径，取3个平板的抑菌圈的平均值，同时用标准质控菌做阳性对照。
2 结果
2.1剖检病变 剖检109份病、死鸡均发现气囊增厚、混浊，心包炎，肝周炎，腹腔有干酪样渗出物。2.2 染色镜检 病料及其培养物镜检可见，109株细菌均为革兰氏阴性小杆菌，单个散在，两端钝圆，表面光滑湿润，两极着色较深，有金属光泽，边缘整齐的小菌落。符合大肠杆菌的形象特征，结合临床症状和病理变化，初步定为大肠杆菌感染[4]。
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本文全文刊于本杂志2012年8月刊，可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章，作者：刘 少娟，如若转载，请注明出处：http://zgdwbj.com/archives/10163
