猪流行性腹泻病病毒的分离鉴定

  猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea, PED)是由冠状病毒属中的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的以猪呕吐、腹泻、脱水为特征的病毒性传染病,各种年龄的猪均可感染,哺乳仔猪受害最严重。该病主要发生于冬季,夏季也可发生。该病常造成养猪业严重经济损失[1,2]。2012年1月,安徽某养猪场发生了哺乳仔猪腹泻、呕吐等特征的疑似猪流行性腹泻疾病,现将诊断过程介绍如下:1 临床症状
  2012年1月初,某猪场哺乳仔猪(31~43日龄)发病,病仔猪呕吐、水样腹泻、个别脱水、消瘦。测发病仔猪体温正常。同圈发病仔猪发病率达100%,不同圈发病仔猪在1.0%~3.6%之间。用抗生素治疗无效。
2 病理变化
  病死仔猪剖检发现:小肠扩张,内充满黄色液体,肠系膜淋巴结水肿。其他器官未见异常。
3 病毒分离鉴定
3.1 病料采集  采病死仔猪空肠内容物及小肠内容物,采集样品冷冻保存。3.2 病料处理  将采集到的小段空肠连同肠内容物用含1000 IU/mL青霉素、1000μg/mL链霉素、PBS液制成5倍悬液,在4℃条件下3000r/min离心30min,取上清液,经0.22μm微孔滤膜过滤,分装,-20℃保存备用。3.3 病料接种与观察  将制备的过滤液(按病毒培养液的1/10)接种于Vero细胞单层上,同时加过滤液量50%的病毒培养液,37℃吸附1h,根据细胞培养瓶大小添加病毒培养液至病毒培养总量,置37℃培养,逐日观察3~4d[3]。3.4病毒细胞分离结果  将疑似感染PEDV的病料处理后接到Vero细胞,接毒后第二天开始与对照细胞(图1)相比出现细胞面粗糙,颗粒增多,有多核细胞(7个~8个甚至几十个),并可见空斑样小区,细胞逐渐脱落等病变特征(图2)。
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本文全文刊于本杂志2012年5月刊,可从知网下载或向本刊订阅。  

原创文章,作者:刘 少娟,如若转载,请注明出处:http://zgdwbj.com/archives/10078

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